组织总磷含量测试盒/分光光度法

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

磷的存在形态包括无机磷与有机磷。无机磷主要指磷酸根,参与生物体内多种代谢,包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等。通过测定总磷与无机磷含量即可了解作物对磷的利用率,进而为合理施肥提供依据。

测定原理:

总磷经消化后,转化成无机磷。钼蓝法是测定无机磷含量的经典方法,一定条件下,钼蓝与磷酸根生成 660nm有特征吸收峰的物质,通过测定 660nm 光吸收,即可计算无机磷含 量,进而可计算出组织中总磷含量。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、离心机、水浴锅、可调式移液枪、1ml 玻璃比色皿、蒸馏水和浓硫酸。
试剂组成和配置:
试剂一:液体×1 瓶,4℃保存(强腐蚀性,强氧化性)。
试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前配制,加入 15 mL 蒸馏水,溶解后再加入 10 mL 试剂二,混匀。
标准品:液体×1 支,-20℃保存。
有机磷消化:
取带盖试管,进入 称取 50℃烘干至恒重的约 0.1 g 组织,加浓硫酸 1.0 mL,盖紧(防止水分散失)后沸水浴 10min 左右,待溶液呈黑色或棕色时取出。稍冷后,加试剂一 200μL,充分混匀,盖紧后继续沸水浴,直到溶液呈透明状,取出室温冷却后,加蒸馏水 8.8 mL,充分混匀;室温,8000g,离心 10min,取上清液待测。
测定操作:
1. 分光光度计预热 30 min,调节波长到 660 nm,蒸馏水调零。
2. 打开水浴锅,调节温度到 40℃。
3. 空白管:取 EP 管,依次加入 500μL 蒸馏水,500μL 试剂三,混匀后置于 40℃水浴保温 10min,室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度,记为 A 空白管。
4. 标准管:取 EP 管,依次加入 50μL 标准液,450μL 蒸馏水,500μL 试剂三,混匀后置于 40℃水浴保温 10min,室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度,记为 A 标准管。
5. 测定管:取 EP 管,依次加入 50μL 上清液,450μL 蒸馏水,500μL 试剂三,混匀后置于 40℃水浴保温 10min,室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度,记为 A 测定管。
注意:空白管和标准管只需测定一次。

组织总磷含量计算公式:
(1) 按照蛋白含量计算
总磷含量(mmol/mg prot) = [C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V 总÷Cpr= 1×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
(2) 按照样本质量计算
总磷含量(mmol/g 干重)= [C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V 总÷W= 1×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
C 标准液:1 mmol/L;V 总:上清液总体积,10 mL=0.01 L;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样品质量,g。
注意事项:
1. 试剂三需临用前配制,并且当天使用完毕。
2. 40min 内完成比色。
3. 检出限为 10μmol/L。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。