总皂苷含量测试盒/分光光度法

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

皂苷(Saponin)是苷元为三萜或螺旋甾烷类化合物的一类糖苷,主要分布于陆地高等植物中, 也少量存在于海星和海参等海洋生物中。许多中草药如人参、远志、桔梗、甘草、知母和柴胡等的主要有效成分都含有皂苷。皂苷还具有 的活性或解 热、镇 静、 等生物活性。测定原理:使用超声波提取样品中的皂苷,利用香草醛-高氯酸显色体系测定总皂苷含量。

测定原理:

使用超声波提取样品中的皂苷,利用香草醛-高氯酸显色体系测定总皂苷含量。

所需的仪器和用品:
可见分光光度计、烘箱、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、高氯酸、乙酸、超声清洗器
试剂的组成和配制:提取液:液体 50ml×1 瓶,4℃保存;

试剂一:12ml×1 瓶,4℃保存;
试剂二:高氯酸,自备;
试剂三:乙酸,自备。总皂苷提取:
样本烘干,粉碎过筛,称取 0.05g,加入 1mL 提取液,超声提取 1h;8000g,25℃离心 10min,取上清待测。
测定步骤:
1、可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 589nm,蒸馏水调零。
2、测定管:取 0.5mL 上清,70℃挥发至干。加入 0.2mL 试剂一和 0.8mL 试剂二,55℃水浴20min。吸取 200μL 加入 1mL 玻璃比色皿中,再加入 1000μL 试剂三,充分混匀后,589nm 下测定吸光度 A1。

3、空白管:取 0.5mL 提取液,70℃挥发至干。加入 0.2mL 试剂一和 0.8mL 试剂二,55℃水浴 20min。
吸取 200μL 加入 1mL 玻璃比色皿中,再加入 1000μL 试剂三,充分混匀后,589nm 下测定吸光度 A2。
计算△A= A1-A2。
总皂苷含量计算:
1.以齐墩果酸为对照品计算
标准状态下的回归曲线为:y = 0.0072x - 0.012,R2 = 0.9968,x 为对照品浓度,μg/mL,y 为吸光度△A。
总皂苷含量(μg/g 干重)=(△A+0.012)÷ 0.0072×V 样÷(V 样÷V 样总×W)=138.89×(△A+0.012)÷W
2.以人参皂苷 Re 为对照品计算
标准状态下的回归曲线为:y = 2.0466x - 0.0016,R2 = 0.9983,x 为对照品浓度,mg/mL,y 为吸光度△A。
总皂苷含量(μg/g 干重)=(△A+0.0016)÷ 2.0466×V 样÷(V 样÷V 样总×W)×1000=488.62×(△A+0.0016)÷W
V 样:加入样本体积,0.5mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样本干重,g;1000, 毫克到微克的换算系数。

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