总糖含量测试盒/微量法

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一,也是新 陈 代 谢的主要原料和贮存物质。总糖也可称为碳水化合物,包括可溶性的单糖,二糖以及不溶性的淀粉,纤维素,几丁质等。

测定原理:

总糖酸水解为还原糖,在 NaOH 和丙三醇存在下,DNS 试剂与还原糖共热后被还原成氨基化合物,在过量的 NaOH 碱性溶液中呈桔红色,在 540nm 处有 吸收峰,以此测定样品中的总糖含量。
需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、沸水浴、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 100mL×1 瓶 ,4℃保存;
试剂三:液体 5mL×1 瓶 ,4℃避光保存;
样品中总糖的提取:
组织:称取约 0.1g 样品,加入 1mL 试剂一,1.5mL 蒸馏水,匀浆,95℃水浴中加热 30min,加入 1mL 试剂二,混匀,用蒸馏水定容至 10mL,8000g 25℃离心 10min,取上清液待测。(注意稀释,见注意事项)液体样本:取 0.1mL 样本,加入 1mL 试剂一,1.5mL 蒸馏水,匀浆,95℃水浴中加热 30min,加入 1mL 试剂二,8000g 25℃离心 10min,取上清液待测。(注意稀释,见注意事项)
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至 95 度。
3、加样表:

混匀,540nm 测定吸光值,ΔA=A 测定管-A 空白管
注意:1、空白管只要做一管。
2、如果 ΔA 大于 2,需要将上清液用蒸馏水稀释,计算公式中乘以相应稀释倍数。
总糖含量计算:
1、标准条件下测定的回归方程为 y = 0.3002x - 0.0507;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。
2、按样本鲜重计算:
总糖(mg /g 鲜重)= [(ΔA+0.0507) ÷0.3002×V1]÷(W×V1÷V2)×稀释倍数=33.311×(ΔA+0.0507) ÷W×稀释倍数。
3、按样本蛋白浓度计算:
总糖(mg /mg prot)=[(ΔA+0.0507) ÷0.3002×V1]÷(V1×Cpr) ×稀释倍数=3.3311×(ΔA+0.0507) ÷Cpr×稀释倍数。
V1:加入样本体积,0.008mL;V2:加入提取液体积,10mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
4、按照液体体积计算:
总糖(mg /mL)=[(ΔA+0.0507) ÷0.3002×V1]÷(V3×V1÷V2)×稀释倍数=116.59×(ΔA+0.0507)×稀释倍数。
V1:加入样本体积,0.008mL;V2:加入提取液体积,10mL/3.5mL; V3:液体样本,0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
注意: 检测限为 1mg/g 鲜重或 10ng/mg prot

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