总巯基测试盒/分光光度法

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

生物体内巯基主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质,而且参与活性氧清除,后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和 GSH 含量,能够间接测定蛋白质巯基含量。

测定原理:

巯基基团与 5,5’- 二硫代-双-硝基苯甲酸(DTNB)反应,生成黄色化合物,在 412nm 处有 吸收峰。
自备实验用品:
天平、研钵、可见分光光度计、恒温水浴锅、1mL 玻璃比色皿、乙醇和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 40 mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 2 mL×1 瓶,4℃避光保存。
样品的制备:
1. 按照组织质量(g):水体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后 8000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2. 血清,培养液:稀释 5 倍后测定,可取 0.1mL 样本,加入 0.4mL 蒸馏水,混匀,置冰上待测。
操作步骤:
1、分光光度计预热 30min,调节波长至 412nm,双蒸水调零。
2、操作表在 1mL 玻璃比色皿中加入如下试剂

计算公式:
总巯基标准曲线:y =3.6222 x- 0.0037,R2 = 1,x 为标品浓度,单位 μmol/mL, y 为吸光度ΔA。
1. 组织:
(1)按样本重量计算
总巯基含量(μmol/g 鲜重)=(ΔA+0.0037)÷3.6222 ×V 样总÷W=0.276×(ΔA+0.0037)÷W

(2)按样本蛋白浓度计算

总巯基含量(μmol/mg prot)=(ΔA+0.0037)÷3.6222×V 样总÷Cpr=0.276×(ΔA+0.0037)÷Cpr
2. 血清、培养液:
总巯基含量(μmol/L)=(ΔA+0.0037)÷3.6222 ×5×103=1380×(ΔA+0.0037)
V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样品质量,g ;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;5:血清,培养液等液体样本稀释倍数;103 :1mmol/L=103μmol/ L
注意事项:
检出限为 10μmol/L。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。