总巯基(-SH)测试盒/微板法

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

一、测定原理:

5,5’-二硫代双,2-硝基苯甲酸(DTNB)与巯基化合物反应时能产生一种黄色化合物,可进行比色定量测定。

二、试剂的组成与配制:
试剂一:标准品粉剂,3 支,4℃密封保存 6 个月。
10mmol/L 标准品贮备液的配制:每次测定前将 1 支标准品粉剂加 1ml 试剂三缓冲液溶解,即为10mmol/L 标准品贮备液,4℃密封保存。
500μmol/L 的标准应用液的配制:10mmol/L 标准品∶试剂三缓冲液=1∶19 即 20 倍稀释配成应用液,按所需量现用现配。
试剂二:透明剂,2ml×1 瓶,4℃密封保存 12 个月(天冷时会凝固,每次测试前适当水浴加温以加速溶解,直至透明方可应用)。
试剂三:缓冲液,20ml×1 瓶,4℃密封保存 6 个月。
试剂四:显色剂,3ml×1 瓶,4℃避光保存 6 个月。
工作液一的配制:按透明剂∶缓冲液∶显色剂=1∶50∶25 的比例混合,用多少配多少。
工作液二的配制:按透明剂∶缓冲液=1∶75 的比例混合,用多少配多少。
三、操作步骤:
1、样本前处理:
组织样本:准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=1:9 的比例,加入 9 倍体积的生理盐水,冰浴条件下机械匀浆,制成 10%的组织匀浆,2500 转/分,离心 10 分钟,取上清液待测。血清(浆)样本: 直接取样 10μl

2、操作表:

三、计算公式:
1、组织中巯基计算公式:
组织中总巯基含量 测定 OD 值 对照OD 值标准品浓度待测样本蛋白浓度(mol / gprot)标准 OD 值 空白OD 值 (500mol / L) (gprot / L)
2、血清中巯基计算公式 
血清中总巯基含量 测定 OD 值 对照OD 值 标准品浓度(mol / L)标准OD值 空白OD值(500?mol /L)

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