总抗氧化能力(T-AOC)检测试盒/比色法

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

一、测定意义:

机体防御体系的抗氧化能力的强弱与健康程度存在着密切联系,该防御体系有酶促与非酶促两个体系,许多酶是以微量元素为活性中心,例如:超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽 S-转移酶(GST)等,非酶促反应体系中主要为维生素、氨基酸和金属蛋白质。

二、测定原理:

机体中有许多抗氧化物质,能使 Fe3+还原成 Fe2+,后者可与菲啉类物质形成稳固的络合物,通过比色可测出其抗氧化能力的高低。

三、试剂组成和配制:

四、操作步骤:
(一)、血清(浆)中 T-AOC 的测定(样本前处理详见附录Ⅰ):

(二)、组织中 T-AOC 的测定(样本前处理详见附录Ⅰ)

(三)、全血中 T-AOC 的测定(样本前处理详见附录Ⅰ):
1、操作步骤:
⑴、前处理:将全血按照一定比例用双蒸水进行破碎(一般按照全血:双蒸水=1:9 处理),制备溶血液,待测。
⑵、操作表:

混匀,放置 10 分钟,波长 520nm,1cm 光径,双蒸水调零,测定各管吸光度值。

参考取样量:全血一般用双蒸水 1:9 稀释取 0.05ml。

五、简便操作表:
混合试剂的配制:
试剂一 : 试剂二 : 试剂三 = 1 : 2 : 0.5 的比例进行配制,现用现配
1、血清(浆)、全血简便操作表:

例如:VE、胡萝卜素、VC、半胱氨酸、蛋氨酸、色氨酸、组氨酸、葡萄糖、铜兰蛋白、转铁蛋白、乳铁蛋白等。这个体系的防护氧化作用主要通过三条途径:(1)消 除 自 由 基和活性氧以免引发脂质过氧化;(2)分解过氧化物,阻断过氧化链;(3)除去起催化作用的金属离子。防御体系各成份之间相互起到了协同作用,以及代 偿 作 用与依赖作用。
附录Ⅰ:T-AOC 测定样本前处理
1、血浆样本前处理:
血浆在测试前 3500 转/分离心 10 分钟,取上清待测,否则有些抗凝剂会引起沉淀及混浊,肝素抗凝的血浆不要离心,血清不需要离心。
2、组织样本的前处理:
组织匀浆的制备:
准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=1:9 的比例,加入 9 倍体积的生理盐水,冰水浴条件下,制备成 10%的匀浆液,2500 转/分离心 10 分钟,取上清液待测。同时用考马斯亮蓝法测定匀浆蛋白浓度。
3、培养细胞的前处理:
培养细胞悬液的制备:
将培养细胞消化,离心,弃上清,留下层细胞,用生理盐水或匀浆介质制备成 107/cm3 的悬液,即 107/ml的悬液,再进行破碎。破碎细胞的方法有三种:
①、用匀浆器匀浆。(可以用匀浆机,也可以用玻璃匀浆器手工匀浆。)
②、用进口的超声粉碎器粉碎。
③、反复冻溶 3 次。(第③种方法有时会影响酶活力。)制备好的细胞悬液不需要离心,在测试加样前要摇匀后取样。同时用考马斯亮兰试剂测定组织蛋白。
4、培养细胞的上清及部分体液均可以按照血清样本处理,一般直接加样。
5、全血样本前处理:一般用双蒸水 10 倍稀释,具体稀释倍数及取样量要做预试。

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