总抗氧化能力(T-AOC)检测试盒(FRAP法)/微板法

一、试剂组成和配制:

二、预期用途

用于血清、血浆、组织匀浆、细胞（或细胞上清）等中总抗氧化能力测定。

三、测定原理

ABTS 在适当的氧化剂作用下氧化成绿色的 ABTS·+，在抗氧化物存在时，ABTS·+ 的产生会被抑制，在405nm 或 734nm 测定 ABTS·+ 的吸光度即可测定并计算出样品的总抗氧化能力。 Trolox 是一种 VE 的类似物，具有和 VE 相近的抗氧化能力，用作其它抗氧化物总抗氧化能力的参考。例如，Trolox 的总抗氧化能力为 1，相同浓度情况下，其它物质的抗氧化能力用其抗氧化能力和 Trolox 相比的倍数来表示。

四、适用仪器

各种类型的酶标仪或者可以测定微量样本的分光光度计。

五、样本前处理

1、血清(浆)、唾液、尿液、细胞上清等液体样本的制备：

血液样本采集后需及时分离血清或血浆，避免溶血，唾液、尿液、细胞上清等直接取样进行测定。血浆建议肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜采用 EDTA。

2、组织样本：

准确称取组织重量，按重量（g）:体积(ml)=1:9 的比例，加入 9 倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，以充分破碎细胞并释放其中的抗氧化物， 4℃，12000 转/分，离心 5 分钟，取上清测定。

3、细胞样本

收集不少于 100 万细胞(建议细胞刮处理，不宜使用胰酶和 EDTA 消化)，加入 200μl 冰冷的 PBS，匀浆或超声以充分破碎细胞并释放其中的抗氧化物，4℃，12000 转/分，离心 5 分钟，取上清测定。

注:组织或细胞样本制成匀浆后需要测定其蛋白浓度，可以用我所 A045-2 考马斯亮蓝法蛋白定量测试盒或者 A045-3 的 BCA 法蛋白定量试剂盒测得.

六、操作步骤

注：反应完后尽快读数，标准品 Trolox 溶液建议用蒸馏水稀释成 0.1、0.2、0.4、0.8、1.0mM

浓度制作标准曲线。(标准曲线只需做一次)（见附录 I）

附录 I：标准曲线的制作

1、前处理:

取 10mM Trolox 标准液用双蒸水稀释成：0.1 mM、0.2 mM、0.4 mM、0.8mM、1.0 mM 制作标准曲线。

2、操作表：

室温反应 6min，波长 405nm（或在 405-425nm 内选），酶标仪读取各孔 OD 值

3、结果：

标准品浓度(mM) OD 值

0 1.0324

0.1 0.9098

0.2 0.8132

0.4 0.6272

0.8 0.2706

1.0 0.1431

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。