总抗氧化能力(T-AOC）测试盒/分光光度法

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。

测定原理:
在酸性环境下，物质还原 Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的 Fe2+-TPTZ 的能力反映了其总抗氧化能力。

自备实验用品：

可见分光光度计、恒温水浴锅、低温离心机、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体 60mL×1 瓶，使用前预冷。

试剂一：液体 50mL×1 瓶，避光保存。

试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体 5mL×1 瓶，避光保存。

样品的制备：

(1) 血清、血浆、唾液或尿液样品

血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 离心 10min，取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超过 30 d）后再测定。

(2) 组织样品

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

(3) 细胞样品

按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎（功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

操作步骤：

混合液(现配现用)：将试剂一、试剂二、试剂三按 10:1:1 的比例混合，使用前预温至 37℃。

注意：空白管只需测定一次。

总抗氧化能力计算：

1.定义：样品的抗氧化能力以达到同样吸光度变化值（△A）所需的标准液离子浓度表示。

标准曲线：y=0.8442x-0.0048，R2=0.9979

2.计算公式：

(1)按蛋白浓度计算

单位定义：每 mg 蛋白每分钟产生 1μmolFe2+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。

总抗氧化能力（U/mg prot）=（△A+0.0048）÷0.8442×1000×V 样÷(V 样×Cpr)÷T=59.228×（△A+0.0048）÷Cpr

(2) 按样品质量计算

单位定义：每 g 样本每分钟产生 1μmolFe2+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。

总抗氧化能力（U/g 鲜重）=（△A+0.0048）÷ 0.8442×1000×V 样÷(V 样÷V 样总×W)÷T=59.228×（△A+0.0048）÷W

(3) 按细胞数量计算

单位定义：每万个细胞每分钟产生 1μmolFe2+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。、

总抗氧化能力（U/10

4cell）=（△A+0.0048）÷0.8442×1000×V 样÷（V 样÷V 样总×细胞数量（万个））÷T=59.228×（△A+0.0048）÷ 细胞数量（万个）

（4）按液体体积计算

单位定义：每毫升样本每分钟产生 1μmolFe

2+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。

总抗氧化能力（U/mL）=（△A+0.0048）÷0.8442×1000÷T= 59.228×（△A+0.0048）

V 样总：加入提取液体积，1 mL； V 样：反应中样品体积，0.03mL；T：反应时间，20min；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL

注意事项：

1. 试剂二对人体有刺激性，请采取适当的防护措施。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴乳胶手套操作。

2. 尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂，否则对本试剂盒的检测结果产生干扰。

3. 样品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。