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柱式质粒DNA小提试剂盒(1～4mL)
产品货号：KL-10179BTN
中文名称：柱式质粒DNA小提试剂盒(1～4mL)
英文名称：Plasmid DNA Mini Kit(1-4mL)
产品规格：100次
发货周期：1～3天
本试剂盒是用于质粒DNA小量制备与纯化的试剂盒。本产品基于改良后的碱变性法，首先菌体经碱裂解法处理使基因组DNA和质粒DNA均变性，再用酸中和，质粒DNA客户快速复性，而基因组DNA不能快速复性，故可以通过离心去除，除去后含质粒的上清用离心吸附柱吸附质粒DNA，洗去杂质，即可得到纯化的质粒DNA。
试剂盒特点：
快速、步骤少，整个操作在30分钟左右完成。
不需要预平衡离心吸附柱。
通用洗柱液即开即用，不需要用户额外加乙醇。
溶液B中有蓝色染料，便于目测非常关键的碱变性和中和反应两步的溶液混匀状况，保证实验效果。
产量高，一次可以处理1～4mL过夜培养的菌液，每毫升过夜培养的细菌可以提取到2～5μg/mL（取决于质粒是高拷贝、中拷贝还是低拷贝）。
纯度高，采用本试剂盒提取的质粒OD比值在1.8～2.0之间，可以直接用于酶切、转化、测序及PCR等。
试剂盒组成：
运输及保存：
常温运输和保存，RNase A溶液需要-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
从筛选平板上挑取单菌落至含抗生素的培养基中，37℃震荡培养12～16小时（摇床转速200-300）。注意：建议使用LB培养基，营养更丰富的培养基会使菌体浓度过高，超过纯化系统处理能力而降低DNA质量。另外，延长培养时间会因细胞死亡、裂解而造成质粒DNA浓度降低。
用1.5mL离心管收集1～4mL过夜培养饱和菌液，室温12000rpm离心1分钟，弃上清，再短暂离心，吸弃残留液体。
第一次使用本试剂盒时，先将全部RNase A溶液全部加入到溶液A中，摇匀后再取用，未用完的溶液A放4℃保存。
加入250μL溶液A，用枪头充分吹打使菌体重悬。注意：细胞未充分悬浮会影响后续碱变性，可以使用漩涡振荡器混匀或使用枪头吸头吹打沉淀至完全混匀。
加入250μL溶液B（如果溶液B在低温放置产生沉淀，须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用），温和反复颠倒混匀看到溶液的蓝色变得均匀并且溶液变粘即可（一般需要颠倒4～6次），然后冰上放置不超过5分钟。注意：冰上放置不要超过5分钟，否则质粒DNA会有碱损伤。千万不要剧烈振荡，否则基因组DNA断裂产生的片段非常容易污染质粒DNA。
溶液B用后需要将盖拧紧存放，否则空气中的二氧化碳会进入溶液，形成碳酸，中和溶液B中的碱，降低其效率。如果溶液B颜色不是蓝色，则表示变质，应该弃之不用并且速跟厂家联系。加入350μL冰上预冷的溶液C，温和反复颠倒直到溶液颜色变成无色（一般需要颠倒混匀4～6次）。混匀后可见白色沉淀物产生，然后冰上放置至少5分钟让质粒DNA复性。
12000rpm离心3分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，部分沉淀物悬浮在上清液中属正常，吸取上清时避开漂浮的沉淀物即可。如果此步的离心在4℃进行，可减轻沉淀物漂浮。
静置2分钟以让质粒DNA与离心吸附柱充分结合，保证静置不少于2分钟十分重要。
室温12000rpm离心1分钟，弃收集管中的废液。
加入500μL的通用洗柱液到离心吸附柱中，室温12000rpm离心1分钟，弃收集管中废液。注意：通用洗柱液中含乙醇，每次用后需要将盖拧紧存放，否则乙醇会挥发。
重复上步1次。
室温12000rpm离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响DNA的后续使用（如残留乙醇使DNA溶液在电泳上样时不能沉淀到加样孔中）。
将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管（自备）中，加入30～100μL 65～80℃预热的DNA洗脱液2.0，室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液2.0也可以用于洗脱，但产量稍微有所降低。
室温12000rpm离心1分钟，离心管底溶液即质粒DNA。
由于我公司的吸附柱结合DNA能力较强，如果再加适量DNA洗脱液2.0到离心吸附柱中，往往还能洗脱下很多质粒DNA（相当于第一次洗脱的20～30%），但注意不要使用上步得到的DNA洗脱液2.0来洗脱。
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