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无内毒素质粒DNA小提试剂盒(1.5～5mL)
产品货号：KL-10178BTN
中文名称：无内毒素质粒DNA小提试剂盒(1.5～5mL)
英文名称：Endotoxin-free Plasmid Mini Kit(1.5-5mL)
产品规格：50次
发货周期：1～3天
本试剂盒采用菌体内毒素清除剂，在质粒提取前就把细胞壁上的内毒素清除掉，彻底避免了目前通用的先提取DNA+内毒素混合物，再从中纯化质粒DNA的弊端。用本试剂盒提取的质粒DNA，内毒素的污染浓度低，适合于转染等对内毒素的污染敏感的实验。
试剂盒特点：
操作简单，只在经典的柱式质粒DNA提取前，增加菌体内毒素清除一步。
去内毒素效果好，处理一次可以去除99%以上的内毒素。
质粒丢失少，产率只比柱式质粒DNA提取试剂盒低5～10%，效果好于先提质粒DNA，再用液相内毒素清除剂处理的方法。
DNA可以直接用于转染等实验。
试剂盒组成：
储存条件：
常温运输及保存，有效期一年。RNase A(10mg/mL)需要低温运输和保存。
使用方法：
一、用菌体内毒素清除剂清除E.coli细胞壁上的内毒素。
收集1.5～5mL E.coli饱和菌液，12000rpm离心1分钟，弃上清，得到细菌沉淀。
加入1mL菌体内毒素清除剂温和混匀后10000～12000rpm离心1分钟，弃上清（含内毒素）。
一次洗涤（1～2步）可以去掉90%以上的内毒素，如果需要，可以再重复上述洗涤操作步骤3次，得到的菌体可以直接进入后续的质粒DNA提取步骤。
二、从无内毒素的E.coli中提取质粒DNA
先将全部RNase A溶液全部加入到柱式质粒DNA提取试剂盒溶液A中，摇匀后再取用，未用完的柱式质粒DNA提取试剂盒溶液A最好在4℃保存。
在第3步所得菌液中加入250μL柱式质粒DNA提取试剂盒溶液A，用枪头充分吹打使菌体重悬（此步在冰上操作效果更佳）。
注意：细胞未充分悬浮会影响后续操作，可以使用漩涡振荡器帮助混匀或使用Tip吸头吹打沉淀至完全混匀。加入250μL柱式质粒DNA提取试剂盒溶液B（如果溶液B有沉淀，用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用），温和反复颠倒混匀4～6次，看到溶液变粘即可，然后冰上放置不超过4～5分钟。
注意：此步处理不能超过5分钟，否则DNA的碱损伤比较严重。同时千万不要剧烈振荡，否则基因组DNA断裂产生的片段非常容易污染质粒DNA。溶液B用后需要将盖拧紧存放，否则空气中的二氧化碳会进入溶液，形成碳酸，中和溶液B中的NaOH，降低其效率）。加入350μL冰上预冷的柱式质粒DNA提取试剂盒溶液C，反复颠倒混匀4～6次，可见白色沉淀物产生，然后冰上放置至少5分钟。
最高转速（12000rpm以上）4℃离心5分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，有时候出现沉淀漂浮是正常现象，取上清时避开漂浮的沉淀即可。如果此步的离心在室温进行，更容易出现沉淀物漂浮的现象。
静置2分钟以让质粒DNA与吸附柱充分结合，此步十分重要。
室温12000rpm离心1分钟，弃收集管中的废液。
加入500μL的通用洗柱液，室温12000rpm离心1分钟，弃收集管中废液。
注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要将盖拧紧存放，否则乙醇会挥发。重复上步1次。
室温12000rpm离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响DNA的后续使用（如DNA上样时不能沉淀到加样孔中）。
将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管（自备）中，加入30～100μL 65～80℃预热的DNA洗脱液2.0，室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液2.0也可以用于洗脱，但产量稍微有所降低。
室温12000rpm离心1分钟，离心管底溶液即质粒DNA。
注：由于吸附柱结合DNA能力较强，如果再加适量DNA洗脱液2.0到离心吸附柱中，往往还能洗脱下很多质粒DNA（相当于第一次洗脱的20～30%），但注意不要使用上步得到的DNA洗脱液2.0来洗脱。
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