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人髓核细胞永生化 KL-PC1137H

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人髓核细胞--永生化

说明书

货号:KL-PC1137H

产品规格:1*10^6细胞数

包装规格:T-25培养瓶

 

产品介绍:

髓核,是乳白色半透明胶状体,富于弹性,为椎间盘结构的一部分,位于两软骨板与纤维环之间。由纵横交错的纤维网状结构即软骨细胞和蛋白多糖黏液样基质构成的弹性胶冻物质。

发育成熟的髓核是一个由软骨样细胞分散在细胞间质内,周围围绕着一个比较致密的胶原纤维网的含水球,位于椎间盘偏后位置,占推间盘横断面积的50%60%;由于它的含水量很高,并和软骨终板紧密接触,是椎间盘接受经软骨终板主要营养途径渗透交换营养的主要部分。

 

细胞特性:

1) 细胞来源于人的椎骨组织。

2) 细胞鉴定:Ⅱ型胶原荧光染色为阳性。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%

4) 不含有 HIV-1HBVHCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5) 细胞生长方式:长梭形细胞,不规则细胞,贴壁培养。

 

产品的运输和保存

视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1) 1mL冻存细胞悬液装于  1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存 1个月。

2) T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过 85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

培养基信息:

我们推荐使用公司研制的髓核细胞专用完全培养液KL82022H-500ml 作为体外培养髓核细胞的培养基。

 

收到细胞后,强烈建议客户使用T25细胞瓶按1:2传代,活细胞不能冻存。

 

操作前请仔细阅读客户须知及相关说明

 

一、所需仪器:

离心机生物安全柜电动移液器CO2培养箱倒置显微镜;液氮罐;恒温水浴锅;超低温冰箱

 

二、所需试剂:

胎牛血清(FBS无菌1×PBS pH=7.2消化液:0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA

完全培养基(含血清);冻存液:90%FBS+10%DSMO异丙醇

 

三、所需耗材:

离心管(15ml50ml);T-25细胞培养瓶一次性无菌移液管(2ml5ml10ml1.8ml冻存管程序降温盒;护目镜;手套等

 

四、使用方法

1您收到细胞后,请按照以下方法进行操作:

取出T-25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置2-3小时,以稳定细胞状态,最后按照后面细胞传代步骤进行细胞传代培养。

2、细胞传代:(细胞传代建议一传二:2个T25培养瓶

1) 当细胞汇合度达到85%以上时,可以进行传代

2) 在生物安全柜内,打开培养瓶瓶口,收集瓶内的培养基

3) 向培养瓶内加入3ml无菌的1×PBS 后,水平放置培养瓶,使PBS能够浸润到培养瓶底面上所有的面积,吸弃PBS

4) 向瓶内加入消化液1ml,浸润底面后放入37℃ CO2培养箱中孵育1~2min;

5) 孵育完成后在倒置显微镜下观察细胞是否变圆飘起,若全部消化下来则直接向培养瓶内加入2ml含10%FBS的完全培养基中,将悬液吸入15ml离心管;

注:如还有部分细胞未消化下来,可采用分步消化:

① 准备一个无菌的15ml离心管,加入2ml含10%FBS的完全培养基

② 将消化下来的细胞吸入中的离心管内中和(避免吹打)

向之前消化的培养瓶中加入1ml胰酶继续消化2min左右,轻拍培养瓶,95%左右细胞脱落后加入2ml含10%FBS的完全培养基中和,中和后的细胞悬液移入①中的离心管内

6) 1000rpm离心5min;

7) 准备两个新的T-25培养瓶,各加入4ml完全培养基;

8) 离心完成后,弃上清,用2ml完全培养基重悬离心细胞,将重悬后的细胞转入2个T-25培养瓶,每个培养瓶各1ml;

9) 水平放置培养瓶,震荡混匀后,将培养瓶置于37℃,5%CO2培养箱中静置培养。

3、细胞冻存:(冻存建议每瓶T25冻一支

1) 6)参照传代步骤

7) 离心完成后,弃上清,用1ml冻存液重悬细胞沉淀,然后转入1.8ml冻存管中

8) 将冻存管转入填充满异丙醇的程序降温盒中,之后转入-80℃冰箱中过夜降温;

9) 第二天,取出降温完成的序降温盒中的冻存管,尽快转入液氮罐中保存。

4、细胞冻存:(冻存建议每瓶T25冻一支

1) 将恒温水浴锅中的水预热到37℃

2) 准备一支15ml离心管,加入5ml含10%FBS的完全培养基,放入37℃水浴锅中预热

3) 戴上护目镜,厚毛线手套后,从液氮罐中取出要复苏的细胞,尽快转入37℃恒温水浴锅中复温晃动冻存管以提高复温速率;

4) 将融化了的冻存管中的细胞吸入事先准备的离心管中,混匀后,1000rpm离心5min

5) 准备一个T-25培养瓶,写上细胞名称、日期,再加入4ml完全培养基

6) 离心完成后弃去上清,用1ml完全培养基重悬细胞后,转入T-25细胞培养中,混匀后转入CO2培养箱中培养静置

注意:从液氮中取出细胞冻存管时,若冻存管内有液氮进入,需拧松冻存管,排出内部残留的液氮,之后拧紧冻存管,置于干冰上,然后放入37℃水浴中,避免温差太大造成液氮快速气化而爆炸。

 

五、注意事项

1. 我们活细胞发货是用T25的细胞瓶,注意观察细胞情况,待贴壁率达到85-90%以上再按说明操作;

2. 传代最好使用康宁T25细胞瓶,若无康宁的,其他T25细胞瓶也可以,但一定要灭菌操作,传代一定要1瓶传2瓶

3. 培养基于 4℃条件下可保存 3-6 个月;

4. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作;

5. 由于细胞生长能力特性,不建议多次传代培养;

6. 该细胞只可用于科研;


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